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  • 產(chǎn)品名稱： T4 DNA Ligase
  • 產(chǎn)品貨號： CSCE1106
  • 貨期： 現(xiàn)貨
  • 價格與訂購： 160
  • 數(shù)量：
    庫存： 100
  • 規(guī)格： 40KU
  • 產(chǎn)品信息
  • 如何訂購
    產(chǎn)品概述
    T4 DNA Ligase可催化dsDNA平末端或粘性末端相鄰核酸的5'磷酸末端和3'羥基末端形成磷酸二酯鍵，還可催化RNA和雙鏈中的ssDNA或RNA鏈連接，但不能催化全單鏈核苷酸連接。適用于標(biāo)記RNA 3'-末端，環(huán)化RNA和DNA寡聚核苷酸以及克隆cDNA等核酸操作。
    產(chǎn)品組分
    組分 CSCE1106(40,000 U)
    T4 DNA Ligase (400 U/μl) 100 μl

     
    保存條件
    -30 ~ -15℃保存，≤0℃運(yùn)輸。
    適用范圍
    1. DNA片段和載體DNA的連接。
    2. DNA片段和Linker或Adaptor DNA的連接。
    單位定義
    在20μl的連接反應(yīng)體系中，6μg的λDNA-HindⅢ的分解物在16℃下反應(yīng)30 min時，有50%以上的DNA片段被連接所需要的酶量定義為1個活性單位(U)。
    反應(yīng)過程
    1.在微量離心管中制配制連接反應(yīng)體系：
    滅菌蒸餾水                                                        To 10 μl
    10 × Ligase Buffer                                            1 μl
    插入片段a                                                         0.3 pmol
    載體DNAb                                                        0.03 pmol
    T4 DNA Ligase (400 U/μl)                                 1 μl
    a. 插入片段與載體的摩爾比應(yīng)在3:1 - 10:1之間。
    b. 平末端載體與DNA片段進(jìn)行連接時，應(yīng)首先將載體進(jìn)行去磷酸化處理，以防止其自身環(huán)化。
    2. 16℃過夜反應(yīng)
    3. 連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化
    ①在冰上解凍克隆用的化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞(如：DH5α Competent cell)。
    ②取10 μl連接產(chǎn)物加入到100 μl感受態(tài)細(xì)胞中，輕彈管壁混勻(請勿振蕩混勻)，冰上靜置30 min。
    ▲ 連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化體積最多不應(yīng)超過所用感受態(tài)細(xì)胞體積的1/10。
    ③ 42℃水浴熱激45 sec后，立即置于冰上冷卻2 - 3 min。
    ④加入900 μl SOC或LB培養(yǎng)基(不添加抗生素)，37℃搖菌1 h(200 - 250 rpm)。
    ⑤將相應(yīng)抗性的LB平板固體培養(yǎng)基在37℃培養(yǎng)箱中預(yù)熱。
    ⑥ 5,000 rpm(2,400 × g)離心5 min，棄掉900 μl上清。用剩余培養(yǎng)基將菌體重懸，用無菌涂布棒在含有正確抗性的平板上輕輕涂勻。⑦ 37℃培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)12 - 16 h。
    Note
    For research use only .