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  • 產(chǎn)品名稱： RhoA Activation Assay Kit
  • 產(chǎn)品貨號(hào)： 80601
  • 貨期： 現(xiàn)貨
  • 價(jià)格與訂購(gòu)： 6800
  • 數(shù)量：
    庫(kù)存： 5
  • 規(guī)格： 96T
  • 產(chǎn)品信息
  • 如何訂購(gòu)
    產(chǎn)品說(shuō)明
      小 G 蛋白是從屬于細(xì)胞調(diào)節(jié)因子中的一個(gè)超家族。Rho 家族是小 G 蛋白中的一個(gè)亞家族，它在細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、細(xì)胞分裂以及基因轉(zhuǎn)錄中發(fā)揮主要作用。而本試劑盒中的 RhoA 就屬于Rho 亞家族中的一種， RhoA 參與生理活動(dòng)過(guò)程中其分子結(jié)構(gòu)會(huì)呈現(xiàn)出 2 種相互轉(zhuǎn)換的形式：與 GTP 結(jié)合的激活狀態(tài)和與 GDP 結(jié)合的非活性狀態(tài)。
        目前RhoA蛋白活性的檢測(cè)主要是依據(jù)小GTP酶RhoA可以與RhoA效應(yīng)蛋白(Rhotekin)的 RBD 區(qū)域結(jié)合，使 RhoA 效應(yīng)蛋白活化從而發(fā)揮生物學(xué)功能，進(jìn)而間接的進(jìn)行 RhoA 活性功能的監(jiān)測(cè)。然而此方法在檢測(cè)過(guò)程中存在著一定的局限性比如 GTP 水解成 GDP 的速度過(guò)快以及 RhoA-GTP 結(jié)合蛋白與 RBD 結(jié)合區(qū)域之間較低的親和力，導(dǎo)致這種檢測(cè)方法的重復(fù)性較差。
       RhoA 活性檢測(cè)試劑盒主要是依據(jù)單克隆抗體能夠特異性的識(shí)別特殊構(gòu)象的 RhoA-GTP 結(jié)合蛋白，而不識(shí)別 RhoA-GDP 結(jié)合蛋白，進(jìn)而簡(jiǎn)單并且快速的進(jìn)行 RhoA 的活性檢測(cè)。同時(shí)試劑盒中的 RhoA-GTP 單克隆抗體也可以進(jìn)行免疫組化實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞和組織中 RhoA 的活性監(jiān)測(cè)。每套試劑盒可以進(jìn)行 20 次檢測(cè)。檢測(cè)原理
      RhoA 活性檢測(cè)試劑盒主要是利用識(shí)別蛋白特異構(gòu)象的 RhoA-GTP 單克隆抗體特異性的去檢測(cè)細(xì)胞提取物或者體外的（樣品需要進(jìn)行 GTPγS 活化處理）活性 RhoA-GTP 的水平。簡(jiǎn)言之，特異性識(shí)別 RhoA 活化構(gòu)象的鼠單克隆抗體可以特異性結(jié)合細(xì)胞裂解液中的 RhoA-GTP 活性蛋白，然后利用 protein A/G 將抗原抗體的結(jié)合物吸附下來(lái)，再利用特異性識(shí)別 RhoA 活化構(gòu)象的兔多克隆抗體進(jìn)行免疫印跡分析進(jìn)行檢測(cè)。 
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    Assay Principle
    Bioyears Biosciences RalA Activation Assay Kit bases on the configuration-specific anti Ral GTP monoclonal antibody to measure the active Ral-GTP levels, either from cell extracts or from in vitro GTPγS loading Ral activation assays. Briefly, anti active Ral mouse monoclonal antibody will be incubated with cell lysates containing Ral-GTP. The bound active Ral will then be pulled down by protein A/G agarose. The precipitated active RalB or RalA will be detected by immunoblot analysis using anti RalB or RalA rabbit polyclonal antibody, respectively.
    試劑盒成分
    1. 特異性識(shí)別 RhoA 活性構(gòu)象的鼠單克隆抗體（Anti active RhoA, Mouse Monoclonal  Antibody (Catalog No. 26904)）：小管裝--30ul (抗體濃度是 1mg/ml)，抗體溶于 PBS（pH7.4）并包含 50%的甘油和 0.05%的疊氮化鈉。此抗體可以特異性識(shí)別所有脊椎動(dòng)物中的  RhoA-GTP。
    2. Protein A/G agarose (Catalog No. 30301) ：小管裝—400ul 包含 200ul Protein A/G agarose和 200ul 20%乙醇溶液。（使用時(shí)溶液需要充分混勻，再吸取）
    3. 5X Assay/Lysis Buffer (Catalog No. 30303)：小瓶裝—30mL 包含 250 mMTris-HCl (pH8.0),750 mM NaCl, 50 mM MgCl2, 5 mM EDTA, 5% Triton X-100。
    4. 特異性識(shí)別 RhoA 活性構(gòu)象的兔多克隆抗體（Anti RhoA, Rabbit Polyclonal Antibody
        (Catalog No.21009)）：小管裝--30ul (抗體濃度是 1mg/ml)，抗體溶于 PBS（pH 7.4包含有 50%的甘油。
    5. 100 X GTPγS (Catalog No. 30302) ：小管裝—100ul (10 mM) ，實(shí)驗(yàn)中 0.5mL 細(xì)胞裂解液使用 5ul GTPγS 標(biāo)記。
    6. 100 X GDP (Catalog No. 30304) ：小管裝—100ul (100 mM) ，實(shí)驗(yàn)中 0.5mL 細(xì)胞裂解液使用 5ul GDP 標(biāo)記。
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    儲(chǔ)存條件
    試劑盒的成分在試劑盒的有效期限內(nèi)必須存放于 4°C 條件下保存。
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    Note
    For Research Use Only.