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- 產品名稱： 人角膜上皮細胞（TPH104）
- 產品貨號： TPH104
- 貨期： 現貨
- 價格與訂購： 8000
- 數量：
庫存： 5
- 規(guī)格： T25瓶
- 產品信息
- 如何訂購
細胞簡介
人角膜上皮細胞分離自眼角膜組織;角膜位于眼球前壁的一層透明膜，約占纖維膜的前1/6，從后面看角膜呈正圓形，從前面看為橫橢圓形。角膜厚度各部分不盡相同，中央部最薄。角膜有十分敏感的神經末梢，如有外物接觸角膜，眼瞼便會不由自主地合上以保護眼睛。為了保持透明，角膜并沒有血管，透過外界空氣、淚液及房水獲取養(yǎng)份及氧氣。角膜分為五層，由前向后依次為:上皮細胞層、前彈力層、基質層、后彈力層、內皮細胞層。其主要功能如下:①角膜是唯一的無血管的組織，具有透明的特性和合成許多蛋白的功能，分三層細胞層，外層即是上皮細胞;②角膜上皮細胞能參與先天性免疫，能感應病原體存在并發(fā)出信號從而激活角膜防御系統(tǒng);③角膜上皮細胞能高效表達醛脫氫酶。角膜上皮細胞的體外培養(yǎng)對研究角膜的生理學、病理學、免疫學以及分子生物學都是極為重要的手段，常用于研究細胞代謝產物、病毒感染、各種生長因子和藥物對細胞生長的影響。
方法簡介
人角膜上皮細胞采用胰蛋白酶-膠原酶混合消化法結合差速貼壁法，并通過上皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10 cells/瓶。
基本信息
組織來源:眼角膜組織
包裝規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝
細胞形態(tài):上皮細胞樣
推薦換液:2~3次/周
生長特性:貼壁生長
推薦傳代:1:2
包被條件:鼠尾膠原Ⅰ(2-5ug/cm2)
消化液:0.25%胰蛋白酶
培養(yǎng)保存
培養(yǎng)體系:人角膜上皮細胞專用培養(yǎng)基(TPHM104)培養(yǎng)條件:氣相:空氣，95%;CO2，5%;溫度:37℃
細胞消化
1．吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次;
2．添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉動培養(yǎng)瓶至消化液覆
蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，37°℃溫浴1-3min;倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化;
3．用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補充新鮮的完全
培養(yǎng)基至5mL，置于37°C、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng);4．待細胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀察;之后按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基。
細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿（如玻瑤爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，
避免細胞因沒貼好影響實驗;包被條件常選用鼠尾膠原l(2-5ug/cm2)，多聚賴氨酸PLL (0.1mg/ml) ,明膠(0.1%)，依據細胞種類
質檢結果
人角膜上皮細胞經PCK免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
注意事項
1.收到常溫細胞后，請檢查產品包裝狀況，若發(fā)現破損、溢出及污染，請及時聯(lián)系我們。
2.先不打開培養(yǎng)瓶蓋，用75%酒精處理培養(yǎng)瓶表面，如果是貼壁細胞，請在培養(yǎng)箱中靜置2-3小時（根據細胞密度狀況決定）用來穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
如果是懸浮細胞則不需要靜置，直接按照懸浮細胞步驟操作。
3.靜置完成后，在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)并拍照記錄。(照片能有效幫助我們提供售后服務)
4.細胞培養(yǎng)過程中如有異常狀況，歡迎進行技術交流。
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Note
For research use only.
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