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  • 產(chǎn)品名稱： Phi29 DNA Polymerase
  • 產(chǎn)品貨號： CSC0827
  • 貨期： 現(xiàn)貨
  • 價(jià)格與訂購： 2000
  • 數(shù)量：
    庫存： 10
  • 規(guī)格： 1250U
  • 產(chǎn)品信息
  • 如何訂購
    產(chǎn)品描述
    Phi29 DNA Polymerase是從Bacillus subtilis噬菌體phi29中克隆的DNA聚合酶。Phi29 DNA Polymerase具有很強(qiáng)的鏈置換活性，可以實(shí)現(xiàn) 對DNA復(fù)雜結(jié)構(gòu)解鏈與復(fù)制，在體外進(jìn)行不依賴于熱循環(huán)的等溫DNA聚合反應(yīng)。Phi29 DNA Polymerase具有很強(qiáng)的鏈親合力，單次聚合反 應(yīng)可以實(shí)現(xiàn)長達(dá)100 kb的連續(xù)聚合延伸，另外，Phi29 DNA Polymerase還具有很強(qiáng)的3’-5’外切校對活性，其保真度是Taq酶的1000倍，高 于目前絕大多數(shù)高保真酶的保真度，這保證了DNA合成的高保真性，非常適用于質(zhì)粒的體外制備和全基因組合成。
    產(chǎn)品組分
    組成 CSC0827-1（250U） CSC0827-2（1250U）
    Phi29 DNA Polymerase 25ul 125ul
    10×Phi29 DNA Polymerase Bufer 1ml 1ml
    儲存條件
    -30 ~ -15℃保存。有效期3年，避免反復(fù)凍融。
    適用場景
    等溫?cái)U(kuò)增。
    單位定義
    一個(gè)單位指在30℃下10 min內(nèi)將0.5 pmol dNTP結(jié)合到酸不溶性沉淀物所需的酶量。
    使用方法
    以環(huán)狀質(zhì)粒測序樣本制備為例：
    通過Phi29 DNA Polymerase的鏈置換活性和高保真的聚合酶活性，可極大的簡化用于測序的環(huán)狀質(zhì)粒的制備過程。
    1.樣本制備
        細(xì)菌培養(yǎng)液：取1 μl新鮮細(xì)菌培養(yǎng)物直接用于擴(kuò)增反應(yīng)。
        平板上的菌落：挑取菌落(避免取到培養(yǎng)基)到 10 μl Nuclease-free ddH2O中并混勻，取1 μl用于擴(kuò)增反應(yīng)。
        已純化的質(zhì)粒：質(zhì)粒用Nuclease-free ddH2O稀釋到1 ng/μl，取1 μl用于擴(kuò)增反應(yīng)。
    2.按下列順序配置反應(yīng)體系：
    組份 體積
    Nuclease-free ddH2O
    4 μl
    10×Phi29 DNA Polymerase Buffer
    1 μl
    隨機(jī)引物(100 μM)
    2.5 μl
    待擴(kuò)增樣品
    1 μl
    Total
    8.5μl
    3.95℃孵育3 min，立即置于冰上冷卻5 min。
    4.在上述反應(yīng)體系中加入下列成分：
    組份 體積
    上一步產(chǎn)物
    8.5 μl
    dNTP 110mM)
    1 μl
    Phi29 DNA Polymerase
    0.5 μl
    Total
    10 μl
    5.震蕩混勻并短暫離心收集。
    6.30℃孵育過夜。
    7.65℃孵育10 min失活Phi29 DNA Polymerase。
    8.擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)純化后可用于測序及其他下游運(yùn)用。
    注意事項(xiàng)
    （1）DTT濃度對于Phi29 DNA Polymerase活力影響較大，當(dāng)10×Phi29 DNA Polymerase Buffer儲存時(shí)間較長或經(jīng)反復(fù)凍融后，可在反應(yīng) 體系中補(bǔ)充 DTT至終濃度為4 mM。
    （2） Phi29 DNA Polymerase具有很高的靈敏度及擴(kuò)增效率，請使用Nuclease-free的槍頭和PCR管，并避免其它反應(yīng)組分污染。
    （3）對于酶的操作需在冰浴上進(jìn)行，以避免酶在室溫長時(shí)間放置而影響酶的活性。
    （4）進(jìn)行等溫?cái)U(kuò)增時(shí)，需自備額外的試劑，例如如2.5 mM dNTP、Random Primer (100μM)以及Nuclease-free H2O等。
    （5）本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
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    Note
    For research use only .