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  • 產(chǎn)品名稱： HRP快速標(biāo)記試劑盒
  • 產(chǎn)品貨號： CS6210
  • 貨期： 現(xiàn)貨
  • 價格與訂購： 1000
  • 數(shù)量：
    庫存： 10
  • 規(guī)格： 0.5mgx2 1mgx5
  • 產(chǎn)品信息
  • 如何訂購
    產(chǎn)品名稱
    HRP快速標(biāo)記試劑盒（最小可標(biāo)記量為0.1mg）
    原理與應(yīng)用
    高碘酸鈉氧化法活化辣根過氧化物酶（HRP）的糖基，經(jīng)過活化的HRP帶有醛基可以與待標(biāo)記物的游離氨基結(jié)合，發(fā)生希夫堿反應(yīng)（Schiff's base reaction）。本試劑盒適用于帶有游離氨基的物質(zhì)的標(biāo)記，比如：帶有游離氨基（伯胺）的抗體、蛋白或者小分子化合物。本試劑盒采用特有穩(wěn)定技術(shù)，活化HRP保存在液體中，吸取方便，最小可以標(biāo)記100μg，讓您的標(biāo)記工作更易把控和操作！
    試劑盒組成

    預(yù)活化HRP

    		 ≥1mg（10mg/mL,實裝120μL液體）

    標(biāo)記啟動液

    0.5mL

    反應(yīng)終止液干粉

    2管（每管可配1mL）

    標(biāo)記物保存液

    1.5mL

    備用透析袋(MD6，截留量12KD）

    4X4CM

    說明書

    1份
    操作步驟
    （1）首先去除待標(biāo)記抗體或蛋白中的疊氮鈉、以及含有氨基的緩沖成分物質(zhì)，比如甘氨酸、Tris 等，還有EDTA等物質(zhì)，可采用透析和超濾的辦法置換緩沖液，以去除干擾物質(zhì)達到最佳標(biāo)記效果！透析或超濾緩沖液首選0.01M CB,PH:9.6緩沖液(說明書附件有經(jīng)驗配方無需調(diào)整PH），若實驗室沒有碳酸鹽試劑再采用0.01M PBS（PH:7.0-7.4均可）透析或超濾置換緩沖液，最后調(diào)整抗體或蛋白的濃度到2mg/mL。如果抗體和蛋白不含上述這些干擾物質(zhì)可以直接用上述PBS或CB緩沖液調(diào)整濃度到2mg/mL備用。
    （2）從4℃取出HRP標(biāo)記試劑盒，使各組分充分混勻。
    （3） 取250μL抗體或蛋白（約0.5mg），加入50μL預(yù)活化HRP(0.5mg)液體中，用移液槍反復(fù)吹打幾次混勻，混勻后加入HRP標(biāo)記啟動液54μL（加入啟動液量依據(jù)：每10μL蛋白和HRP混合液加1.8μL啟動液）繼續(xù)混勻數(shù)次，避免產(chǎn)生氣泡。然后避光30℃-37℃溫箱偶聯(lián)反應(yīng)2-3小時，若遇快要下班也可放4℃反應(yīng)24小時左右（此法效果一樣或者更好不必?fù)?dān)心）。
    （4）偶聯(lián)結(jié)束將反應(yīng)終止液粉管中加入1mL去離子水混勻，取25μL加入3所述反應(yīng)液中（加入終止液量依據(jù)：每1mg HRP加入終止液50μL），充分混勻，室溫放置1 小時或者4℃ 2小時。
    （5）終止完成后，可直接加入等體積的標(biāo)記物保存液，充分混勻，置于-20℃保存。如果想更上長期的保存建議先用0.067M PBS  PH:7.0（說明書附件有經(jīng)驗配方）透析或超濾置換緩沖液后再加標(biāo)記物保存液。這樣可以保存3年左右甚至更長。
    注意事項
    （1）待標(biāo)記物緩沖液成分過于復(fù)雜以及含有氨基小分子和NAN3的初始緩沖液必須透析或超濾置換掉，請采用0.01M PBS（PH:7.0-7.4均可）或0.01M CB,PH:9.6緩沖液均可。
    （2）如果待標(biāo)記物不是抗體是其它蛋白，那么請根據(jù)分子量參考蛋白和酶用量：若分子量在40KD以上建議1mg蛋白使用1mg HRP；如果分子量在30KD左右，建議1mg蛋白使用1.3mg HRP；如果分子量在20KD左右，建議1mg蛋白使用2mg HRP；如果分子量在10KD左右，建議1mg蛋白使用4mg HRP；此時啟動液和終止液請按步驟3和4描述標(biāo)準(zhǔn)適量加入；如果標(biāo)記量為小于0.5mg的抗體或蛋白（最小可以0.1mg），HRP和其它試劑加入量按比例折算即可。
    （3）小分子藥物不建議直接標(biāo)記HRP，因為HRP的結(jié)構(gòu)不能結(jié)合足夠的藥物會造成效價偏低，這種情況建議先偶聯(lián)BSA增加小分子偶聯(lián)量再進行HRP標(biāo)記，這樣效果會非常好。
    （4）如果待標(biāo)記物含有其它蛋白需要把無關(guān)蛋白同樣計算進去，盡快如此也請您慎重選擇這樣的樣品進行標(biāo)記。
    （5） 本試劑盒保存4℃可以保證1年內(nèi)開啟有效，活化HRP開啟后小心取用切勿污染堿性物質(zhì)。
    （6） 終止液干粉一共2支，原則上每一支配好后僅限一次性使用，因此您可以根據(jù)您的實驗總量合理配制使用。
    附
    1.0.01M CB ，PH:9.6緩沖液配制：取NaHCO3, 0.67g和Na2CO3, 0.21g加水到1L溶解完全即可，不用調(diào)節(jié)PH。
    2.0.067M PBS,  PH:7.0緩沖液配制：取NaH2PO4·2H2O，5.35g和Na2HPO4·12H2O, 11.7g以及NaCL，9g加水1L溶解完全，最后添加NaOH，0.35g再次混勻后即可，不用再調(diào)節(jié)PH。
    Note
    For research use only .