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  • 產(chǎn)品名稱： PNGase F
  • 產(chǎn)品貨號(hào)： CSE00005
  • 貨期： 現(xiàn)貨
  • 價(jià)格與訂購： 800
  • 數(shù)量：
    庫存： 100
  • 規(guī)格： 15000U 75000U
  • 產(chǎn)品信息
  • 如何訂購
    產(chǎn)品英文名（Product Name）
    PNGase F
    產(chǎn)品中文名
    肽N-糖苷酶；糖基肽酶
    CAS NO
    83534-39-8
    icon
    產(chǎn)品描述（Description）
    肽N-糖苷酶 F (PNGase F)是一種酰胺水解酶，主要由腦膜炎膿桿菌等革蘭氏陰性菌分泌。PNGase F可以裂解由天冬酰胺連接的高甘露糖，及雜合和復(fù)雜的寡糖糖蛋白。PNGase F的切割位點(diǎn)為糖蛋白內(nèi)側(cè)N-乙酰葡萄糖胺（GlcNAc）和天冬酰氨殘基之間的酰胺鍵，同時(shí)將酶解后蛋白上的天冬氨酰轉(zhuǎn)化為天冬氨酸。
    PNGase F 不會(huì)去除常見植物糖蛋白上含有核心α-(1,3)- 巖藻糖連接的寡糖。
    儲(chǔ)存條件（Storage）
    儲(chǔ)存于 -20°C，保質(zhì)期 12 個(gè)月。
    運(yùn)輸方式（Shipping）
    藍(lán)冰運(yùn)輸
    狀態(tài)（Form）
    Liquid
    儲(chǔ)存溶液（Buffer）
    20 mM Tris-HCl pH 7.5, 50 mM NaCl, 5 mM EDTA,50%Glycerol
    表達(dá)宿主（Host）
    E. coli
    分子量
    36kDa
    純度
    >95% as determined by SDS-PAGE
    比活性
    1,800,000 U/mg
    酶活單位定義
    1個(gè)酶活力單位指在10ul的反應(yīng)體系中，37℃條件下1小時(shí)從10ug變性RNase B中除去超過95%的碳水化合物所需要的酶量定義為一個(gè)活性單位（U）。
    酶切反應(yīng)條件
    37℃ ，酶切反應(yīng)1h，每1ug酶可以酶切10ug底物。icon
    實(shí)驗(yàn)示例（Experiment Example）
    使用方法（Standard Operating Procedure）
    1. 在變性條件下進(jìn)行SDS-PAGE的蛋白質(zhì)去糖基化
    (1) 在水中加入50μg目標(biāo)糖蛋白（或低離子強(qiáng)度的相容緩沖液）至最終體積為12μl。
    (2) 加入1μl 的5％SDS。
    (3) 加入1μl的 1MDTT。
    (4) 在95℃加熱5min使樣品變性。
    (5) 在室溫下冷卻5min。
    (6) 加入2μl的0.5M磷酸鈉緩沖液（pH 7.5）。如果pH在PNGase F（pH 6-10）范圍內(nèi)，可以使用其他緩沖液。   
    (7) 加入2μl的10％NP-40。可用Triton X-100替代NP-40。
    (8) 加入2μl的PNGase F.
    (9) 在37°C孵育1-3h。
    注意：糖蛋白的去糖基化可以通過SDS-PAGE上的凝膠移位來觀察，去糖基化的產(chǎn)物比糖基化的底物移動(dòng)的更快。
     
    2.  在非變性條件下進(jìn)行質(zhì)譜檢測(cè)的蛋白質(zhì)去糖基化
    (1) 在50mM碳酸氫銨（pH 7.8）中加入20μg的糖蛋白至終體積為18μl。
    (2) 加入2μl的PNGase F.
    (3) 在37°C孵育2-18h。
    注意：在變性條件下大多數(shù)底物能夠更好的去糖基化，在非變性條件下可能需要增加PNGase F的量和延長孵育時(shí)間。
    Note
    For research use only .