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  • 產(chǎn)品名稱： SARS-CoV-2(2019-nCoV) Surrogate Virus Neutralization定量試劑盒
  • 產(chǎn)品貨號： CSK00021
  • 貨期： 現(xiàn)貨
  • 價格與訂購： 2880
  • 數(shù)量：
    庫存： 100
  • 規(guī)格：
  • 產(chǎn)品信息
  • 如何訂購
    產(chǎn)品名稱（Product Name）
    SARS-CoV-2(2019-nCoV) Surrogate Virus Neutralization定量試劑盒
    貨號（Catalog#）
    CSK00021
    產(chǎn)品描述（Description）
    本試劑盒基于中和 ELISA 分析技術，將 RBD 蛋白預先包被在酶標板上，之后將陽性對照標準品、陰性對照和分析樣本分別加入到微孔中反應，再加入HRP標記的ACE2蛋白，樣本中的RBD中和抗體會阻斷RBD和ACE2之間的相互作用，清洗掉未結(jié)合的試劑，將顯色底物溶液添加到微孔中顯色，顯色強度與樣本中的RBD中和抗體濃度成反比。
    本試劑盒用于測定血清和血漿樣本RBD中和抗體的濃度。
    穩(wěn)定性&儲存（Stability &Storage）
    收到試劑盒后請將標準品、檢測溶液 A、陽性對照、陰性對照以及預包板保存于-20℃，封板膜放置于常溫保存,其余試劑請置于 4 ℃保存?zhèn)溆谩?/span>
    試劑盒按推薦溫度保存6個月，信號強度降低小于 10%。
    運輸方式（Shipping）
    藍冰運輸
    使用方法（Standard Operating Procedure）
    所需設備及試劑
    450 nm濾光片酶標儀，含540 nm或570nm校正波長更佳
    單道或多道微量移液器，移液器槍頭
    去離子水
    500 mL量筒
    樣品稀釋管或不同規(guī)格EP管
    吸水紙
    微孔板振蕩儀（可選）
     
    一、樣品收集與儲存
    處理所有的血液和血清，請按照NCCLS提供的處理和儲存血清和血漿樣本的建議（1990年H18-A批準的血液樣本處理和處理標準程序）。
    1.血清樣本：全血室溫放置60分鐘或4℃過夜，然后1000 x g離心15分鐘，取上清檢測，或分裝后于≤-20℃冰箱保存，避免樣品反復凍融。
    2.血漿：使用EDTA、肝素或檸檬酸鹽作為抗凝劑收集血漿，樣品采集后30分鐘內(nèi)1000 x g離心15分鐘，取上清檢測，或分裝后于≤-20℃冰箱保存，避免樣品反復凍融。
     
    二、試劑準備
    使用前將所有試劑和樣本置于室溫平衡。
    1.20×濃縮清洗液：如果濃縮清洗液中有晶體析出，平衡至室溫并搖勻，直到晶體完全溶解，25mL濃縮清洗液使用去離子水定容至500mL，得到清洗工作液。
    2.血清、血漿樣本：推薦血清，血漿使用樣本稀釋液 1:9稀釋后上樣，例如10μL樣本加入90μL樣本稀釋液。如果樣本檢測值超出標準曲線范圍，可適當調(diào)整稀釋倍數(shù)并重新測定，或預估樣本中抗體濃度，在實驗之前預先稀釋數(shù)個梯度同時進行測定。
    3.標準品工作液：陽性對照臨用前震蕩混勻后用掌上離心機瞬時離心，使液體集中于管底，使用樣本稀釋液1:100稀釋得到第一個標準點10ug/mL，依次進行倍比稀釋操作得到共計7個標準點      10μg/mL、 5μg/mL、2.5μg/mL、1.25μg/mL、0.625μg/mL、0.3125μg/mL、0.15625μg/mL，最后再以陰性對照工作液為零標準（0 μg/mL），共計8個標準點，建議每個標準點至少做2個平行孔。
    4.陰性對照工作液：陰性對照臨用前震蕩混勻后用掌上離心機瞬時離心，使液體集中于管底，使用樣本稀釋液1:9稀釋至工作濃度，例如10μL陰性對照加入90μL樣本稀釋液。
    5.檢測溶液A工作液：檢測溶液A臨用前震蕩混勻后用掌上離心機瞬時離心，使液體集中于管底，使用檢測溶液稀釋液1:2000稀釋至工作濃度。
    6.顯色液：避光保存，顯色時100μL /孔。 
    7.終止液：顯色完畢后50μL /孔。
     
    三、實驗步驟
    使用前將所有試劑和樣本置于室溫，建議對所有標準品和待測樣本進行一式兩份的分析。
    1. 按照前面章節(jié)的指示準備所有試劑和樣本。 
    2. 從板架上取下多余的微孔板條，將其放回裝有干燥劑包的鋁箔袋中，然后重新密封保存于-20℃。
    3. 每孔分別加入50μL稀釋好的標準品工作液、陰性對照工作液和待測樣本，用封板膜封住，37℃孵育30分鐘。
    4. 每孔分別加入50μL稀釋好的檢測溶液A工作液，用封板膜封住，使用微孔板振蕩儀或手動輕微震蕩5分鐘后，37℃孵育1小時。
    5. 棄去孔內(nèi)液體，每孔加入 300μL的清洗工作液，輕微震蕩后棄去孔內(nèi)液體，將酶標板倒扣在吸水紙上輕拍，使殘留在孔內(nèi)的液體全部去除，重復洗板 5 次，此過程也可采用尖嘴噴射瓶，多道移液器或自動洗板機來完成。
    6. 每孔加入100μL顯色液，37℃避光顯色8-10分鐘。
    7. 每孔加入50μL終止液，孔里的顏色應該由藍色變至黃色，如果孔內(nèi)顏色為綠色或顏色變化不均勻，輕輕震動酶標板使顏色均一。
    8. 擦干酶標板底部水氣，立刻用酶標儀在 450nm 波長測量各孔的O.D.值，如果波長校正可用，則設置為540 nm或570 nm，如果波長校正不可用，則從450 nm的讀數(shù)中減去540 nm或570 nm的讀數(shù)，這種修正可去除酶標板讀數(shù)中的光學偏差，如果沒有校正波長，可直接讀取450 nm的讀數(shù)，但讀值有可能不準確。
     
    四、標準曲線制作
    取每個標準品、陰性對照、樣本的復孔平均值 O.D.，然后計算抑制率，抑制率計算公式如下：
    以標準品的濃度為橫坐標，抑制率為縱坐標，選取抑制率在10%-90%區(qū)間的4-5點繪出標準曲線（R2值越趨近于1曲線越精確），然后再將待測樣本的抑制率代入標準曲線的回歸方程式計算出濃度，從標準曲線上計算出的濃度須乘以稀釋倍數(shù)，即可計算出待測樣本RBD中和抗體實際濃度。
    如果樣本檢測值超出標準曲線范圍，可適當調(diào)整稀釋倍數(shù)并重新測定，或預估樣本中抗體濃度，在實驗之前預先稀釋數(shù)個梯度同時進行測定。
    五、標曲案例
    標準曲線僅用于演示，每次實驗均需生成單獨的標準曲線。

    標準點（ug/ml）

    O.D.

    抑制率

    10

    0.06

    97.08%

    5

    0.11

    94.41%

    2.5

    0.29

    85.18%

    1.25

    0.84

    56.44%

    0.625

    1.44

    25.53%

    0.3125

    1.76

    9.04%

    0.15625

    1.72

    10.96%

    陰性對照

    1.94

    /

    六、檢測范圍

    0.15625ug/mL—10ug/mL

    七、精密度

    批內(nèi)差：CV<12%

    批間差：CV<15%

     八、穩(wěn)定性

    試劑盒按推薦溫度保存6個月，信號強度降低小于 10%。
     九、實驗細節(jié)說明

    1.在試劑盒標簽上的有效期內(nèi)使用，不要與其他廠家的試劑盒混合使用。

    2.如果陰性對照或陽性對照檢測OD值超出檢測范圍，可適當縮短顯色時間。

    3.為避免交叉污染，不同標準品、樣本、試劑的加樣需更換移液槍頭，每管試劑使用單獨的容器儲存。

    4.在孵育過程中貼緊封板膜。

    5.顯色液避光保存，臨用前15分鐘從冰箱取出室溫平衡。

    6.濃縮清洗液（20×）需使用去離子水1：20稀釋至工作濃度，去離子水不包含在試劑盒中，需實驗人員自備。

    7.終止液為酸性溶液，具有輕微腐蝕性，使用時避免接觸皮膚、眼、耳、口等暴露部位，如不慎接觸，使用大量清水沖洗后觀察接觸部位反應，如情節(jié)嚴重請及時就醫(yī)。

    8.試劑盒酶標板條可按需拆卸使用，已開封的試劑盒建議在1個月內(nèi)使用，未開封的試劑盒所有試劑均按試劑瓶標簽上所示保存，收到試劑盒后請將陽性對照、陽性對照、檢測溶液 A以及 96 孔板保存于-20℃，其余試劑請置于 4 ℃保存?zhèn)溆谩?/span>

    十、常見問題解決指南

    問題

    原因

    解決方案

    標準曲線差

    移液不精確

    檢查和校正移液器

    標準品準備不正確

    進行正確的標準品梯度稀釋

    O.D 值低

    孵育時間太短

    保證充足的孵育時間

    溫度不正確

    試劑平衡至室溫并保證孵育溫度正確

    試劑體積不正確

    檢查移液器并確保加樣體積與說明書一致

    精密度低

    移液不精確

    檢查和校正移液器

    混勻不充分

    充分混勻和吸取試劑

    洗滌不充分

    按說明書要求充分洗滌和浸泡

    背景值高

    洗滌不充分

    按說明書要求充分洗滌和浸泡

    清洗液污染

    重新配置清洗液

    靈敏度低

    試劑盒儲存不當

    試劑盒短期整體保存于4℃，長期保存根據(jù)說明書分開保存各組分

     
    組分和說明（Component and Instruction）

    樣品清單及儲存條件

    樣品名稱

    規(guī)格

    描述

    推薦儲存條件

    預包板

    1 板

    96孔聚苯乙烯微孔板（12列*8孔），預包被RBD蛋白。

    密封狀態(tài)放置于-20℃保存。

    陽性對照

    1 管

    12μL重組人源RBD中和抗體，濃度 1mg/mL,臨用前用樣本稀釋液配置7個標準點。

    放置于-20℃保存。

    陰性對照

    1 管

    60μL陰性對照，臨用前用樣本稀釋液1:10 稀釋至工作濃度。

    放置于-20℃保存。

    檢測溶液A

    1 管

    12μL HRP標記 ACE2 蛋白（含防腐劑），臨用前用檢測溶液稀釋液1:2000稀釋至工作濃度。

    放置于-20℃保存。

    樣本稀釋液

    1 瓶

    25 mL稀釋液（含防腐劑），用于陽性對照、    陰性對照、血清、血漿的稀釋。

    放置于4℃保存。

    檢測溶液稀釋液

    1 瓶

    25 mL稀釋液（含防腐劑），用于檢測溶液A的稀釋。

    放置于4℃保存。

    濃縮清洗液

    1 瓶

    25 mL （20×）濃縮清洗液（含防腐劑），       臨用前用去離子水1:20稀釋至工作濃度。

    放置于4℃保存。

    顯色液

    1 瓶

    12 mL TMB（四甲基聯(lián)苯胺）。

    放置于4℃保存。

    終止液

    1 瓶

    6 mL 2M 酸液。

    放置于4℃保存。

    封板膜

    4 片

    用于實驗中封閉酶標板。

    放置于常溫保存。

      *在試劑盒保質(zhì)期內(nèi)使用

    Note
    For research use only .